대장균군 정성시험과 정량실험 비교 및 정리

대장균군 정성시험 (단순히 음성, 양성만을 판단)

정성시험이란 ? 시료 중에 어떠한 화학종이 함유되어 있는가를 조사하는 시험으로, 검출·확인에는 특이 반응과 물리적 성질이 이용된다.

 

1. 추정시험(presumit test)

1. Lactose Broth(LB배지)를 만들어 10ml씩 시험관에 넣어준다.

2. 듀람관(발효관)을 넣어준다. 이때 듀람관에 기포가 형성되지 않게 흔들어서 기포 빼준 후 autoclave 에 돌린다.

3. 시료를 각각 10ml, 1ml, 0.1ml 씩 넣어준다.

4. 37도에서 24시간 배양한다.

5. 대장균이 유당을 분해하여 가스가 발생하면 양성으로 판정, 확정시험을 실시한다.

2. 확정실험 (confirmed test)

1. 가스가 발생한 시험관의 배양액을 BGLB(brilliant green lactose broth) 발효관에 접종한다. 또는 직접 emb배지에 도말 접종한다.

 

2. BGLB 배지를 만들어 10ml씩 시험관에 넣고, 듀람관(발효관)을 넣어준다.

- 양성반응이 나온 LB 배지에서 1백금이 따서 접종한다.

- 37도 24시간 배양

- 대장균이 유당을 분해하여 가스가 발생하면 양성으로 판정하고 EMB 또는 Endo 배지에 접종한다. (Streaking)

3. EMB(eosin methylene blue agar plate ) 배지에서 흑녹색의 금속성 광택을 나타내는 콜로니가 자랐다면 양성이다.

EMB 배지에는 peptone, lactose, sucrose, H2PO4, Eosin Y, Methylene blue,

 

Agar 등이 들어감. 여기서 Methylene blue는 산화, 환원 상태를 나타내는 지시약이니

다른 걸 쓸 수도 있음.

Eosin Y :　빛을 반사해서 금속성 광택으로 보이게 만듦 + 그람 양성세균 생장 억제

Methylene blue : 산화, 환원상태에 따라서 색이 다름. Lactose 와 산소결합에 있어서 경쟁을 하게 되는데, 이때 대장균이 있다면, 대장균이 Lactose를 분해하고 Methylene blue가 산소를 얻으면서 산화상태가 된다. Methylene blue가 산화 상태일 때, 청색을 띤다. (보통은 청색인데, 다른 물질과의 간섭으로 녹색으로 보인다. )( 환원 상태일 때에는 무색 )

3. 완전시험complete test

1. 확정시험에서 양성반응이 나타났다면 LB배지와 사면한천배지(NA)에 접종한다.

2. 37도 24시간 배양

3. LB배지에서 가스가 발생하면 사면한천배지에서 자란 콜로니를 취해서 그람염색실시 (imvic test 또한 가능함)

그람 음성 - 사프라닌에 의해 붉게 염색됨,간균이 관찰됨

 

대장균군 정성시험은 곧 대장균 정성시험과 같다.

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정성시험과 정량시험의 차이

정량분석은 어떤 미지의 시료의 량을 측정하는 것이고

정성분석은 어떤 성분이 그 시료에 포함되어 있는지 찾아내는 것.